Около 85% всего населения планеты имеют в крови особый антиген D, который и определяет положительную резус-принадлежность. Остальные 15%, не имеющие в эритроцитах антигена, считаются резус-отрицательными. Определение Rh проводят при заборе крови у доноров, перед гемотрансфузией, беременным женщинам, и один из методов для проведения такого анализа – типирование при помощи цоликлона анти-D.
Что такое цоликлон Анти-D
Этот реагент представляет собой прозрачную жидкость на основе моноклональных антител к антигенам D человеческих эритроцитов. Культуральная жидкость разводится с солевым раствором и позволяет проводить исследование путем визуального оценивания реакции агглютинации.
Существует две разновидности таких реагентов:
- классический анти-D используется чаще всего, действует по принципу непрямой агглютинации;
- анти-D с пометкой «Супер» вызывает прямую реакцию агглютинации;
- анти-D-Микс содержит компоненты, присутствующие в этих двух реагентах, и помогает одновременно уточнять и резус-принадлежность, и группу крови.
Сегодня исследования с применением таких реагентов используют не только в специализированных стационарах (хирургии, гематологии), но и в частных лабораториях, и могут быть сделаны без направления по желанию пациента.
Алгоритм типирования на плоскости
Исследование проводят при помощи планшетки, на пластинке. При этом соблюдают температуру воздуха не менее 18 и не более 25°С, включают яркое освещение.
Пошаговая технология определения резус-фактора цоликлонами.
- На пластинке кроме названия реагента необходимо указать данные пациента.
- На плоскость наносят примерно 0,1 миллилитра реагента, что соответствует одной большой капле. Дополнительные инструменты не нужны, поскольку флакон с цоликлонами оснащен удобной крышкой с отверстием для дозирования.
- Рядом с каплей реагента помещается меньшая в 5–10 раз небольшая капля крови (капиллярная, венозная) или эритроцитосодержащей массы.
- Обе капли перемешиваются пластмассовой или стеклянной палочкой, обязательно стерильной.
- Выждав 10–15 секунд, нужно аккуратно покачать пластинку из стороны в сторону, чтобы лучше соединить реагент и исследуемый материал. Результат можно оценивать только спустя 3 минуты.
В среднем через 0,5–1 минуту можно заметить характерную для такого анализа крупнолепестковую гемагглютинацию. Если она идет медленно, пластину можно подогреть до 36,8–37°С, что послужит катализатором процесса и повысит скорость реакции.
Определение Rh в пробирке
Для проведения такого исследования потребуется пятипроцентная взвесь кровяных телец, помещённых в физраствор. Далее с исследуемым материалом работают следующим образом:
- В емкость добавляют 0,1 миллилитра Анти-D и мелкую каплю эритроцитов.
- Жидкости аккуратно перемешивают, затем инкубируют 30 минут. Для ускорения наступления реакции при помощи термостата или на водяной бане пробирку можно подогреть до 37 °С.
- Далее используют метод центрифугирования – 30 секунд при температуре 22–25 °С на 1500–2000 оборотах.
- Чтобы осадок поднялся со дна наверх, содержимое слегка встряхивают.
Наличие агглютинации проверяют визуально – если присутствует антиген D (Rh+), на фоне прозрачного физраствора образуется явно видимая агглютинация (отдельные сгустки). Если антигена нет, осадок разбивается, жидкость выглядит однородной, равномерно окрашенной и без прозрачных участков.
Если результаты уточнения Rh сомнительны, исследование нужно провести повторно, что исключит неверную трактовку и позволит обнаружить слабые антигены.
Комментарии