Как выполняется определение резус-фактора цоликлонами

Как выполняется определение резус-фактора цоликлонами

Около 85% всего населения планеты имеют в крови особый антиген D, который и определяет положительную резус-принадлежность. Остальные 15%, не имеющие в эритроцитах антигена, считаются резус-отрицательными. Определение Rh проводят при заборе крови у доноров, перед гемотрансфузией, беременным женщинам, и один из методов для проведения такого анализа – типирование при помощи цоликлона анти-D.

Что такое цоликлон Анти-D

Этот реагент представляет собой прозрачную жидкость на основе моноклональных антител к антигенам D человеческих эритроцитов. Культуральная жидкость разводится с солевым раствором и позволяет проводить исследование путем визуального оценивания реакции агглютинации.

Существует две разновидности таких реагентов:

  • классический анти-D используется чаще всего, действует по принципу непрямой агглютинации;
  • анти-D с пометкой «Супер» вызывает прямую реакцию агглютинации;
  • анти-D-Микс содержит компоненты, присутствующие в этих двух реагентах, и помогает одновременно уточнять и резус-принадлежность, и группу крови.

Сегодня исследования с применением таких реагентов используют не только в специализированных стационарах (хирургии, гематологии), но и в частных лабораториях, и могут быть сделаны без направления по желанию пациента.

Алгоритм типирования на плоскости

Исследование проводят при помощи планшетки, на пластинке. При этом соблюдают температуру воздуха не менее 18 и не более 25°С, включают яркое освещение.

Пошаговая технология определения резус-фактора цоликлонами.

  1. На пластинке кроме названия реагента необходимо указать данные пациента.
  2. На плоскость наносят примерно 0,1 миллилитра реагента, что соответствует одной большой капле. Дополнительные инструменты не нужны, поскольку флакон с цоликлонами оснащен удобной крышкой с отверстием для дозирования.
  3. Рядом с каплей реагента помещается меньшая в 5–10 раз небольшая капля крови (капиллярная, венозная) или эритроцитосодержащей массы.
  4. Обе капли перемешиваются пластмассовой или стеклянной палочкой, обязательно стерильной.
  5. Выждав 10–15 секунд, нужно аккуратно покачать пластинку из стороны в сторону, чтобы лучше соединить реагент и исследуемый материал. Результат можно оценивать только спустя 3 минуты.

В среднем через 0,5–1 минуту можно заметить характерную для такого анализа крупнолепестковую гемагглютинацию. Если она идет медленно, пластину можно подогреть до 36,8–37°С, что послужит катализатором процесса и повысит скорость реакции.

Определение Rh в пробирке

Для проведения такого исследования потребуется пятипроцентная взвесь кровяных телец, помещённых в физраствор. Далее с исследуемым материалом работают следующим образом:

  1. В емкость добавляют 0,1 миллилитра Анти-D и мелкую каплю эритроцитов.
  2. Жидкости аккуратно перемешивают, затем инкубируют 30 минут. Для ускорения наступления реакции при помощи термостата или на водяной бане пробирку можно подогреть до 37 °С.
  3. Далее используют метод центрифугирования – 30 секунд при температуре 22–25 °С на 1500–2000 оборотах.
  4. Чтобы осадок поднялся со дна наверх, содержимое слегка встряхивают.

Наличие агглютинации проверяют визуально – если присутствует антиген D (Rh+), на фоне прозрачного физраствора образуется явно видимая агглютинация (отдельные сгустки). Если антигена нет, осадок разбивается, жидкость выглядит однородной, равномерно окрашенной и без прозрачных участков.

Если результаты уточнения Rh сомнительны, исследование нужно провести повторно, что исключит неверную трактовку и позволит обнаружить слабые антигены.

Самые свежие новости медицины на нашей странице в Вконтакте

Читайте также

Оставить комментарий

Вы можете использовать HTML тэги: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <s> <strike> <strong>